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聲明：上海賽抑生物科技有限公司為本公司（大連美侖生物）在上海地區(qū)的銷售分公司
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細胞增殖及毒性檢測試劑盒(CCK-8)增強型
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產品問答
問
CCK-8兩個波長都要測嗎？ 需要怎樣計算?
答
只測450nm下的OD值，細胞存活率 = [(As - Ab)／(Ac - Ab)] ×100% 抑制率 = [(Ac - As)／(Ac - Ab)] ×100% As：實驗孔（含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測藥物）的吸光度 Ac：對照孔（含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測藥物）的吸光度 Ab：空白孔（不含細胞和待測藥物的培養(yǎng)基、CCK-8）的吸光度
問
每次測定的數值不一樣，是什么原因？如何解決？
答
可能會有以下幾個原因： 1)當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。 2)有可能會因為CCK-8沾在壁上而產生誤差，建議在加入CCK-8后，輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。 3)每孔的細胞數量過多或過少。請預先在1,000~100,000個/孔范圍內摸索條件。 4) 重復試驗請保證孵育時間、接種細胞數相同。
問
CCK-8會導致細胞死亡嗎？
答
CCK-8本身對細胞毒性特別小，作用時間長不會導致細胞都死亡，但是細胞長滿了，本身代謝會引起細胞死亡
問
CCK-8除了用酶標儀還可以用什么儀器？紫外分光光度計行么？
答
一般cck都是用酶標儀，紫外分光光度計最好不用，因為紫外我沒記錯一次只能測一個孔吧，而且還得把孔內液體吸出來到紫外用的皿里，而且檢測時間很長，CCK-8對孵育時間敏感，這樣誤差太大了
問
OD值偏高？
答
可以確認下培養(yǎng)時間，一般肉眼可見顏色變化即可檢測
問
做CCK-8經常有氣泡，對吸光度有影響，有什么辦法去除么？
答
有氣泡，沒辦法去除，但是可以避免有氣泡，加藥什么的槍頭抵著孔壁，慢點加液體，基本不會產生氣泡
問
細胞能一邊培養(yǎng)一邊檢測？
答
培養(yǎng)一段時間測CCK-8，然后換液后可以接著養(yǎng)。
問
反映時間怎么確定？數值必須是1么？
答
0.1-2.5都可以，最佳是1.0左右
問
如何設定空白對照
答
在不含細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時，還應考慮藥物的吸收，可在不含細胞，加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。
問
鋪板細胞量有什么要求嗎？
答
96孔板細胞建議鋪板5000-10000個/孔；不同細胞類型接種密度不一致，客戶可自行摸索，我們鋪96孔板，一般密度5*10的4次方，取100ul；可以您自己對細胞計數，保證每孔細胞數量一致。或者可以計數，方法：按不同細胞數鋪板，貼壁后加CCK-8，孵育1小時，然后檢測，OD值在1.5左右是最佳鋪板數
問
哪些物質會影響CCK-8的測定？
答
當有氧化還原性物質存在時會影響CCK-8的測定，因此當所加藥物為氧化還原性物質時需要換液再進行檢測。
問
CCK-8對于不同的細胞，靈敏度是否一樣？
答
不一樣，懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞，一般加入CCK-8培養(yǎng)0.5-4小時吸光度已經很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。
產品簡介
產品參數
質檢證書
產品圖譜
摩爾濃度計算器
相關論文

產品描述

Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8），是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。

CCK-8試劑中含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在條件下，可以被線粒體內的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物Formazan （參考圖1），生成的Formazan數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析，細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。

圖1. WST-8檢測原理圖

WST-8與以往的增殖/毒性測定試劑相比，具有明顯優(yōu)點（參考表1）。美侖CCK-8試劑盒具有靈敏度高、反應時間短、線性范圍寬、數據可靠、重現性好等特點，可以廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。

 產品優(yōu)勢

★  靈敏度高，線性范圍寬，數據可靠，重現性好

★  操作簡便，省時省力

★  甲瓚產物為水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞

★  無需有機溶劑，對細胞毒性低

★  即用型溶液，毋需預制，適合于高通量藥物篩選

★  檢測效果與進口品牌相媲美

數據展示

采用某進口品牌CCK-8試劑盒作為對照，在相同的實驗條件下，檢測細胞活力。結果如圖2所示，美侖CCK-8測得的吸光/細胞數目比值稍大，靈敏度稍高，與對照CCK-8相比實驗差異?。ㄔ?%左右，幾乎相當于不同批次之間的差異）。

圖2. 使用美侖CCK-8與對照進口品牌CCK-8檢測細胞數標準曲線的比較

保存條件

2-8℃避光保存，自生產之日起12個月有效；-20 ℃保存，24個月有效。反復凍融會增加背景值，干擾實驗測定，因此請將經常使用的試劑保存在2-8℃。

使用方法

請參考說明書。

注意事項

1. 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
2. CCK-8反應時間的確定：一般情況下，白細胞顯色比較困難，因此需要增加細胞數量和延長CCK-8反應時間。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色，因此懸浮細胞在加入CCK-8培養(yǎng)5-4小時后，可先從培養(yǎng)箱取出，目測或用酶標儀測定顯色程度，若顯色困難可以繼續(xù)培養(yǎng)數小時后再確定。對于貼壁細胞，CCK-8的培養(yǎng)時間一般為0.5-4小時，在培養(yǎng)20分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度。
3. 每孔接種細胞數：當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔（100 μL培養(yǎng)基）。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔（100 μL培養(yǎng)基）。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
4. 設定空白對照：在不含細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗（細胞毒性實驗）時，還應考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。
5. 影響CCK-8測定的物質： 由于CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應，所以如果待測體系中存在氧化還原物質則可能會干擾檢測結果，還原性物質會使吸光度增加，氧化性物質會使吸光度減小，因此應需設法去除這些物質的影響。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底吸光度而消除，因此不會對檢測結果造成影響。
6. 測定波長：如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議采用雙波長進行測定，檢測波長450nm，參比波長600-650nm。如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度最高。
7. 當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。
8. 如果細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應洗滌細胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。

9.為了您的安全和健康，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。


我司所售出產品僅供于科研研究用途（非臨床科研研究），每次銷售產品行為都適用于我司網上所列明的通用銷售條款。
英文名字：Cell Counting Kit-8

質量標準：Meilunbio

MA0218-1 Meilunbio(1ML*1瓶)
MA0218-2 Meilunbio(5ML*1瓶)
MA0218-3 Meilunbio(10ML*10瓶)
MA0218-5 Meilunbio(10ML*1瓶)
MA0218-6 Meilunbio(5ML*10瓶)

請輸入貨號:
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摩爾濃度計算器 （本計算器可幫助您計算出特定溶液中溶質的質量、溶液濃度和體積之間的關系）
摩爾濃度計算公式：質量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
質量（g）
=
濃度 (mol/L)
x
體積 (L)
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